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稳定L1210/DDP细胞株的构建方法

点击次数:427 发布时间:2018-03-27
L1210/DDP细胞株利用稳定细胞系生产生物制品时,细胞系的质量直接决定了产品的质量属性及工艺开发的难以程度。细胞系的稳定性使得后期工艺放大更简单易行;基因重组方式的zui优化可以大大减少下游纯化工艺的开发时间和难度。稳定细胞库的构建以及稳定性考察保证了重组生物制品一旦上市即可以有持续稳定的产品供应。而符合药典规定的细胞库既是产品上市的必要条件,同时也是保证产品使用安全的重要保证。
2.L1210/DDP细胞株来源
目前常用的生产细胞株为中国仓鼠卵巢癌细胞(Chinese Harmster Ovary cell,CHO)。原始细胞株经过几十年的发展和改进,目前主流的CHO来源的细胞株主要有三种:CHO -K1(基于GS体系),CHO DG44(基于DHFR缺陷型的细胞系)和CHO-S(通过驯化筛选生长速度快的CHO细胞得到)。
以CHO细胞为基础,目前发展成熟的工业细胞培养平台有三个:Lonza的GS system,Sigma-Aldrich的CHOZN和ThermoFisher的CHO-S。它们的特点如下:
(1)GS System:Lonza 2012年推出的CHO K1SV GS-KO在CHO K1的基础上敲除GS基因得到的新一代的CHO K1细胞系。
(2)CHO ZN:Sigma-Aldrich在2011年推出了CHOZN DHFR-/-和CHOZN GS-/-。其中CHOZNGS-/-是利用ZFN技术敲除GS基因得到的新一代的CHO K1细胞系。
(3)CHO-S:ThermoFisher在CHO S的基础上开发出三种不同类型的亚细胞株:FreeStyle CHO S cells,cGMP CHO S,ExpiCHO S。
3.稳定L1210/DDP细胞株的构建方法
重组细胞株的构建流程为:转染-细胞系筛选-单克隆化-克隆筛选-工艺优化(确定生产细胞株)。成功构建的重组细胞株要求基因序列正确、表达正确、表达产物结构正确及产物应具有符合预期的生物活性。 
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